- Elizabeth Shaw: Een jonge wetenschapper die deel uitmaakt van de bemanning van het ruimteschip Prometheus. Ze wordt gedreven door haar geloof om de Engineers, de scheppers van de mensheid, te vinden.
- David: Een androïde die ook lid is van de Prometheus-crew. Hij is zeer intelligent en nieuwsgierig, maar ook meedogenloos en berekenend.
- Weyland: De CEO van Weyland Corp., het bedrijf dat de Prometheus-expeditie financierde. Hij is geobsedeerd door het vinden van de Engineers en het verkrijgen van onsterfelijkheid.
- Meredith Vickers: De vertegenwoordiger van Weyland Corp. op de Prometheus. Ze is een meedogenloze en ambitieuze zakenvrouw die alles wil doen om haar doelen te bereiken.
- Janek: De kapitein van de Prometheus. Hij is een ervaren astronaut die probeert zijn bemanning te beschermen en tegelijkertijd de missiedoelstellingen te vervullen.
- Holleweg: Een bioloog van de Prometheus, de romantische partner van Shaw. Hij is gefascineerd door de Engineers en hun creaties.
- Veldveld: Een geoloog op de Prometheus die graag de buitenaardse maan wil verkennen. Hij is roekeloos en impulsief, waardoor hij zichzelf en zijn bemanningsleden vaak in gevaar brengt.