- Horatio Caine's vrouw, Marina, gespeeld door Sofia Milos: Marina Caim was de vrouw van Horatio tijdens de eerste seizoenen van de show. Ze was oorspronkelijk een privédetective die Horatio bij sommige zaken hielp. Hun huwelijk viel uiteindelijk echter uiteen vanwege Horatio's toewijding aan zijn werk.
- Calleigh Duquesne, gespeeld door Emily Procter: Calleigh Duquesne is een CSI Level 3 en de dochter van een politieagent uit Miami. Ze is een ervaren forensisch wetenschapper en staat bekend om haar expertise op het gebied van DNA-analyse en vuurwapenidentificatie.
- Natalia Boa Vista, gespeeld door Eva LaRue: Natalia Boa Vista voegt zich in seizoen 5 bij het team als CSI Level 2. Ze is een voormalige undercoveragent en heeft een achtergrond in psychologie, waardoor ze de motivaties van criminelen begrijpt.
- Delko's vrouw, Marisol Delko, gespeeld door Elizabeth Berkley Lauren: Marisol Delko is de vrouw van Eric Delko. Ze trouwen in de seizoensfinale van seizoen 4. Marisol werkt ook als rechercheur moordzaken in Miami.
- Yelina Salas, gespeeld door Sofia Vassilieva: Yelina Salas voegt zich bij het team in seizoen 9. Ze is de dochter van een Russische gangster en heeft kennis van de interne werking van criminele organisaties.