Hij is alleen speelbaar in de 16-bits game Sonic &Knuckles , die als afzonderlijke cartridge werd uitgebracht. Je kunt dan de Sonic &Knuckles-cartridge op een Sonic the Hedgehog 3-cartridge plaatsen om de 'Lock-on'-functie te ontgrendelen , waardoor je als Knuckles kunt spelen in een nieuwe versie van het spel.
Hoewel Knuckles niet direct speelbaar is in Sonic 3, verschijnt hij wel als baaspersonage in de game.