A polyacrylamide gel wordt bereid met sleuven daarin . De gel wordt gevormd door het gieten van een hete vloeistof polyacrylamide oplossing in een ondiepe doos . De doos moet een comblike structuur met tanden die naar beneden wijzen in de oplossing bevatten . De polyacrylamide gel wordt een snel nadat deze is gegoten en de kam verwijderd rechthoekige openingen onthullen .
Natriumdodecylsulfaat ( SDS )
Het eiwit wordt behandeld met natriumdodecylsulfaat ( SDS ) teneinde de subeenheden van een groot eiwit denatureren , zodat elk kan afzonderlijk worden gemeten . De voordelen hiervan zijn dat de SDS geeft de negatief geladen polypeptiden zodat ze migreren naar de negatieve pool , of anode , van de gel . Ten tweede , de SDS zorgt ervoor dat alle subeenheden zal dezelfde lading hebben en dus zullen alle migreren in de gel op basis van hun moleculaire massa in plaats van kosten .
Toevoeging van eiwit
Een kleine hoeveelheid DNA of eiwit wordt in een van de rechthoekige openingen aan het uiteinde van het gel . Een elektrische stroom wordt uitgevoerd door de gel bij neutrale pH. Ongeveer 10 microliter van een DNA ladder en twee controles ook geladen in de gel . De DNA-ladder wordt gebruikt om te meten hoe ver het monster in het proces van elektroforese verplaatst toelaten .
Elektroforese
De machine wordt aangezet tot 100 volt en laat gedurende 30 minuten . Nadat de monsters werden geëlektroforeerd gedurende 30 minuten , de gel samen met een schaal verwijderd en in een kleuring tray ongeveer drie minuten . Dit wordt dan gevolgd door het plaatsen van de gel in warm water gedurende vijf minuten . De gel is nu klaar om op de lichtbak te worden geplaatst om de beweging van de DNA-fragmenten te observeren .
Andere overwegingen
Bij het bekijken van de gel onder het licht , een aantal belangrijke dingen in overweging moeten worden genomen . Een cel kan ofwel heterozygoot of homozygoot voor het gen naargelang de kopie aanwezig zijn of niet in beide kopieën of slechts een voorbeeld. De heterozygote resultaat kan als een enkele band , omdat de DNA-segmenten die zijn geamplificeerd efficiënter donkerder in de gel . Een kleurstof wordt ook toegevoegd , zodat elke polypeptide kan worden gezien , zowel tijdens als na de elektroforese .