De Kirby-Bauer-techniek is een standaard microbiologische methode die wordt gebruikt om de gevoeligheid van bacteriën voor antimicrobiële middelen te bepalen. Het omvat het meten van de remmingszone van de bacteriegroei rond met antibiotica geïmpregneerde schijven die op een agarplaat zijn geplaatst die is geïnoculeerd met het testorganisme. Hier zijn de algemene stappen van de Kirby-Bauer-techniek:
1. Bereiding van het inoculum :
- Er wordt een zuivere kweek van de testbacteriestam verkregen en gekweekt in een geschikt kweekmedium om de logaritmische groeifase (troebelheid) te bereiken.
- De bacteriesuspensie is gestandaardiseerd op een specifieke troebelheid, doorgaans gelijkwaardig aan een troebelheidsnorm van 0,5 McFarland, om een consistente inoculumdichtheid te garanderen.
2. Inenting van agarplaat :
- Voor de test worden steriele agarplaten gebruikt die Mueller-Hinton-agar of een ander geschikt agarmedium bevatten.
- Met behulp van een steriel wattenstaafje wordt het gestandaardiseerde inoculum gelijkmatig over het oppervlak van de agarplaat verspreid om een samenvloeiend gazon van bacteriegroei te creëren.
- Men laat de geïnoculeerde plaat een paar minuten drogen om overtollig vocht te absorberen.
3. Toepassing van antibioticaschijven :
- Steriele antibioticaschijfjes met specifieke concentraties antimicrobiële middelen worden met gelijkmatige tussenruimten op het oppervlak van de agarplaat geplaatst met behulp van een steriele pincet of een schijfdispenser.
- De schijven worden voorzichtig aangedrukt om een goed contact met het agaroppervlak te garanderen zonder de schijven te beschadigen.
4. Incubatie :
- De geïnoculeerde plaat met antibioticaschijven wordt gedurende een bepaalde periode (doorgaans 16-24 uur) bij een geschikte temperatuur (meestal 35-37°C) geïncubeerd om bacteriegroei en de diffusie van antimicrobiële middelen mogelijk te maken.
5. Meting van remmingszones :
- Na incubatie worden de platen onderzocht op de aanwezigheid van remmingszones rond de antibioticaschijven.
- Met behulp van een liniaal of een digitale schuifmaat wordt de diameter van elke remmingszone gemeten in millimeters.
- De zonediameter geeft de gevoeligheid van het testorganisme voor het specifieke antibioticum aan.
6. Interpretatie van resultaten :
- De gemeten zonediameters worden vergeleken met gestandaardiseerde tabellen of richtlijnen, zoals die van het Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), om de gevoeligheid of resistentie van het testorganisme tegen de geteste antimicrobiële middelen te bepalen.
- Organismen worden gecategoriseerd als vatbaar, intermediair of resistent op basis van de grootte van de remmingszones en vastgestelde interpretatiecriteria.
7. Kwaliteitscontrole :
- Om de nauwkeurigheid en betrouwbaarheid van de Kirby-Bauer-techniek te garanderen, worden kwaliteitscontrolestammen met bekende gevoeligheidspatronen in elke batch tests opgenomen om de prestaties van de methode en de gebruikte reagentia te controleren.
Het is belangrijk om gestandaardiseerde procedures te volgen en de resultaten te interpreteren volgens vastgestelde richtlijnen om betrouwbare en klinisch relevante informatie te verkrijgen uit Kirby-Bauer-antibioticagevoeligheidstests.