De eerste optredens van het gezelschap vonden plaats in The Theatre en The Curtain, twee theaters in Shoreditch, net buiten de City van Londen. In 1599 verhuisde het gezelschap naar het nieuw gebouwde Globe Theatre aan de zuidelijke oever van de Theems, dat hun belangrijkste locatie werd.
The Lord Chamberlain's Men stond bekend om zijn getalenteerde ensemble van acteurs, waaronder Burbage, die werd beschouwd als een van de grootste acteurs van zijn tijd. Kempe was een gerenommeerd komisch acteur, terwijl Heminges bekend stond om zijn vertolking van tragische rollen. Er wordt aangenomen dat Shakespeare zelf in een aantal van zijn toneelstukken heeft gespeeld, hoewel de exacte rollen die hij speelde niet met zekerheid bekend zijn.
Het repertoire van het gezelschap omvatte een grote verscheidenheid aan toneelstukken, van komedies en geschiedenissen tot tragedies en romances. De werken van Shakespeare vormden een belangrijk deel van het repertoire van het gezelschap, en veel van zijn toneelstukken, waaronder 'Hamlet', 'Othello' en 'King Lear', werden voor het eerst uitgevoerd door de Lord Chamberlain's Men.
Het gezelschap toerde ook uitgebreid door Engeland en trad op in verschillende dorpen en steden. Dit hielp de toneelstukken van Shakespeare en de populariteit van theater buiten Londen te verspreiden.
In 1603, na de dood van koningin Elizabeth I en de toetreding van koning James I, kreeg het bedrijf een koninklijk patent en werd het bekend als de King's Men. Ze bleven optreden in het Globe Theatre totdat het in 1613 door brand werd verwoest. Na de verwoesting van de Globe verhuisde het gezelschap naar het Blackfriars Theatre, waar ze optraden totdat de Engelse Burgeroorlog in 1642 alle theaters sloot.
Ondanks de uitdagingen en veranderingen waarmee ze door de jaren heen werden geconfronteerd, speelde het acteergezelschap van Shakespeare een cruciale rol in de ontwikkeling en het succes van het Engelse renaissancetheater. Hun uitvoeringen van toneelstukken van Shakespeare hielpen hem te vestigen als een van de grootste schrijvers aller tijden.