Matilda: Een mooie jonge vrouw die het voorwerp is van Ambrosio's verlangen. Ze wordt uiteindelijk vermoord door Ambrosio nadat ze hem heeft afgewezen.
Agnes: Een jonge non die de leerling van Ambrosio is. Ze wordt verleid door Ambrosio en wordt zwanger. Ze sterft uiteindelijk tijdens de bevalling.
Don Raymond: De abt van het klooster waar Ambrosio woont. Hij is een wijze en rechtvaardige man die Ambrosio probeert te helpen zijn verleidingen te overwinnen.
Donna Elvira: Een rijke en machtige vrouw die Ambrosio's minnaar wordt. Ze verraadt hem uiteindelijk en draagt hem over aan de inquisitie.
De inquisiteur: Een machtige en meedogenloze man die het proces van Ambrosio voorzit en hem uiteindelijk ter dood veroordeelt.